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Otimização de códons / melhoria do sítio ativo da enzima

Otimização de códons / melhoria do sítio ativo da enzima


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É necessário usar a síntese de novo de DNA ao tentar melhorar a expressão de proteínas por otimização de códons? Ou existem outras maneiras?

por exemplo. Digamos que o gene que codifica a enzima necessária para sintetizar um certo metabólito secundário seja conhecido e já esteja sequenciado. A abordagem de clonagem padrão é extrair mRNA de (digamos) tecido de planta, em seguida, construir uma biblioteca de cDNA e expressá-la em E Coli usando um plasmídeo adequado.

Agora, se a sequência de neucleotídeos precisa ser modificada (para aumentar a expressão), é necessário começar de novo ou há maneiras mais fáceis de começar a partir do mRNA / cDNA?

Uma variante da mesma pergunta é quando eu gostaria de modificar o gene porque um estudo de acoplamento de proteína mostra algumas maneiras de modificar o sítio ativo da enzima, alterando um ou dois resíduos na sequência de aminoácidos.


Postagem meio antiga, estou surpreso que ainda não tenha uma resposta. Não há razão para que você não possa modificar o RNA ou cDNA diretamente, você só precisa emendar o gene corretamente para fazer as alterações desejadas. Você está absolutamente certo de que mesmo uma única mudança de aminoácido pode fazer uma enorme diferença se estiver no lugar certo.